QIAGEN Ni-NTA Agarose現(xiàn)貨30210/30230/30250
QIAGEN Ni-NTA Agarose現(xiàn)貨30210/30230/30250
A Agarose是親合層析用基質(zhì),用于純化帶有His標(biāo)簽的重組蛋白。His標(biāo)簽上的組氨酸殘基能高特異性的結(jié)合到固定的鎳離子上。細(xì)胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上,His-tagged蛋白結(jié)合,其他蛋白則流過基質(zhì)。洗滌后,His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。
QIAGEN Ni-NTA Agarose現(xiàn)貨30210/30230/30250
Ni-NTA Agarose是親合層析用基質(zhì),用于純化帶有His標(biāo)簽的重組蛋白。His標(biāo)簽上的組氨酸殘基能高特異性的結(jié)合到固定的鎳離子上。細(xì)胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上,His-tagged蛋白結(jié)合,其他蛋白則流過基質(zhì)。洗滌后,His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。
利用重力流層析純化His-tagged蛋白
Ni-NTA Agarose是親合層析用基質(zhì),用于純化帶有His標(biāo)簽的重組蛋白。His標(biāo)簽上的組氨酸殘基能高特異性的結(jié)合到固定的鎳離子上。細(xì)胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上,His-tagged蛋白結(jié)合,其他蛋白則流過基質(zhì)。洗滌后,His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。
在天然條件下一步純化蛋白。
在天然條件下純化蛋白。人血清應(yīng)答因子(SRF)在帶有牛痘病毒載體的HeLa細(xì)胞中表達(dá),使用Ni-NTA Agarose以及在洗滌和洗脫步驟中不同濃度的咪唑純化。銀染法使得蛋白可見。CL:細(xì)胞裂解物;FT:流過部分;W1: 0.8 mM洗滌液;W2 & W3: 8 mM 洗滌液;W4 & W5: 40 mM 洗滌液;E1 & E2: 80 mM 洗脫液。(數(shù)據(jù)由德國H. Stunnenberg, EMBL, Heidelberg提供。)
Performance
Ni-NTA Agarose中的Ni-NTA與Sepharose CL-6B support偶聯(lián),具有強結(jié)合能力,非特異性結(jié)合少(參見"One-step purification under native conditions")。這種材料對于多數(shù)的生產(chǎn)規(guī)模和柱純化具有的可操作性。Ni-NTA Agarose可單獨訂購,也包含在QIAexpress Kits中。QIAexpress Kits是適用于大腸桿菌His-tagged蛋白高效表達(dá)和純化的完整試劑盒。
Principle
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System基于獲得的Ni-NTA(氨基三乙酸鎳)樹脂,對含有6個或以上組氨酸殘基(連續(xù)或交替)親合標(biāo)簽的蛋白選擇能力強。該技術(shù)可在天然或變性條件下,從所有表達(dá)體系中一步純化幾乎所有的His-tagged蛋白。NTA含有四個鎳離子螯合位點,與鎳的結(jié)合能力比其他僅有三個金屬螯合位點的金屬螯合純化方法的結(jié)合能力強。多出的一個螯合位點可防止鎳離子脫落,因此具有更強的結(jié)合能力,蛋白純度比金屬螯合純化方法的蛋白純度高。QIAexpress技術(shù)可用于從桿狀病毒、哺乳動物細(xì)胞、酵母和細(xì)菌等各種表達(dá)體系中純化His-tagged蛋白。
Procedure
His-tagged蛋白的純化包括四個步驟:裂解、結(jié)合、洗滌和洗脫(參見Protein purification with the Ni-NTA protein purification system)。使用QIAexpress 技術(shù)純化重組蛋白無需依賴于蛋白的三維結(jié)構(gòu)或6xHis標(biāo)簽。因此可實現(xiàn)在天然或變性條件下,從稀釋溶液或細(xì)胞裂解液中一步純化蛋白??墒褂脧娮冃詣┖拖礈靹└咝芙夂图兓荏w、膜蛋白和形成包涵體的蛋白。洗滌緩沖液中可包含有能高效去除非特異性結(jié)合產(chǎn)物的試劑(見表)。在溫和條件下加入100–250 mM咪唑作為競爭性洗脫試劑或降低pH值,可洗脫得到純化蛋白。